一种粪便微生物保存液及其制备方法与流程

文档序号:19583834发布日期:2019-12-31 20:21
一种粪便微生物保存液及其制备方法与流程

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本发明涉及微生物样本检测保存的狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台领域,特别是一种粪便微生物保存液及其制备方法的狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台领域。



背景狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台:

肠道微生物在离体后,若不能进行及时的核酸提取,会导致菌群的数量、种类及丰度发生变化。粪便是提取肠道微生物核酸的来源,为了提高肠道基因检测准确性,需要在收集粪便后保证肠道菌群的稳定,而现有的一些医院或体检中心的粪便化验由于受地点与实验条件、检测人员的限制,不能对粪便样本进行及时检测化验,需要对不能及时化验检测的粪便样本进行保存。传统的粪便样本采用冷藏法进行保存,即粪便采集后存放于-20℃或更低的温度中,使其中的肠道微生物处于低代谢速率下,在一段时间内稳定菌群的数量与组成,然而冷藏法依然受限于采样条件,使得样本保存操作较为复杂且保存成本较高,不利于样本的运输,冷藏过程中可能还会对微生物活性和质量有一定影响。随着科研狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台的发展,人们通过粪便微生物保存液对粪便样本进行保存,但现有的一些粪便微生物保存液存在粪便样本稳定保存效果不佳,保存时间较短,制备方法较为复杂等问题。



狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台实现要素:

本发明的目的就是解决现有狗65足彩下载_狗65体育_狗65是哪个平台中的问题,提出一种粪便微生物保存液及其制备方法,能够使粪便样本的常温保存效果好,保存液使用简便,制备方法整体简单。

为实现上述目的,本发明提出了一种粪便微生物保存液,所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成,所述蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/l~2mol/l,所述金属螯合剂的终浓度为1mmol/l~100mmol/l,所述氯化钠的终浓度为0.1mmol/l~1mol/l,所述生物缓冲液的终浓度为1mmol/l~100mmol/l,所述稳定剂的终浓度为0.1%/l~10%/l。

作为优选,所述蛋白抑制剂为硫氰酸胍,所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠,所述生物缓冲液为tris-ci缓冲液。

作为优选,所述稳定剂为柠檬酸钠。

作为优选,所述保存液的ph为7.5。

作为优选,所述金属螯合剂和tris-ci缓冲液的ph均为8.0。

作为优选,所述保存液用于保存粪便样本中的微生物。

作为优选,所述保存液和粪便样本按w/v为(3~5):1的比例进行混匀用于保存粪便样本中的微生物。

一种粪便微生物保存液的制备方法,包括以下几个步骤:

第一步,向容器内加入1/2体积的无菌水;第二步,依次向容器内加入氯化钠、tris-ci缓冲液、乙二胺四乙酸、稳定剂、硫氰酸胍;第三步,向容器内加入去离子水完成定容;第四步,溶液调ph至7.5,经过灭菌和室温冷却后即可得到保存液。

本发明的有益效果:本发明通过在粪便微生物保存液中添加柠檬酸钠作为稳定剂和辅助防腐剂与硫氰酸胍、edta等组合使用,增强保存液常温保存效果,能实现样本的常温保存和常温运输,保存液使用简便,保存粪便样本满足poct、ngs检测要求,整体制备方法整体简单。

本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。

【附图说明】

图1是本发明粪便微生物保存液的十种菌属引物荧光定量pcr检测结果示意图。

【具体实施方式】

本发明一种粪便微生物保存液,包括所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成,蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/l~2mol/l,金属螯合剂的终浓度为1mmol/l~100mmol/l,氯化钠的终浓度为0.1mmol/l~1mol/l,所述生物缓冲液的终浓度为1mmol/l~100mmol/l,稳定剂的终浓度为0.1%/l~10%/l,蛋白抑制剂为硫氰酸胍,金属螯合剂为乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠,生物缓冲液为tris-ci缓冲液,稳定剂为柠檬酸钠,柠檬酸钠中还可加入dmso、醋酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐、链球菌素,保存液的ph为7.5,金属螯合剂和tris-ci缓冲液的ph均为8.0,保存液用于保存粪便样本中的微生物。

一种粪便微生物保存液的制备方法,包括以下几个步骤:

第一步,向容器内加入1/2体积的无菌水;第二步,依次向容器内加入20ml氯化钠、6mltris-ci缓冲液、20ml乙二胺四乙酸、34ml柠檬酸钠、100ml硫氰酸胍;第三步,向容器内加入320ml去离子水定容至1l;第四步,溶液调ph至7.5,经过灭菌和室温冷却后即可得到保存液。

粪便微生物保存液在使用时,需要将保存液和粪便样本按w/v为3:1进行混匀即可对粪便样本进行保存,如取制备好的保存液3ml放入容器内,之后取1g粪便样本放入容器内之后将二者混匀,将容器放置在室温下密封保存并避免强光照射,之后在0、3、7、14、21、28、42、60天时取样进行dna核酸提取,并采用十种菌属引物进行荧光定量pcr检测,并测定粪便样本中微生物的核酸浓度。具体检测结果如图1所示如下。

参阅图1,检测结果示意图显示扩增结果在六十天内基本保持一致,表明该粪便微生物保存液可长时间保存粪便样本中微生物核酸的稳定性。

该粪便微生物保存液中添加柠檬酸钠,由于柠檬酸钠本身无毒,具有ph调节和缓冲作用,可作为辅助螯合剂降低降解风险,还具有防腐作用,作为稳定剂和辅助防腐剂与硫氰酸胍、edta等组合使用,增强保存液常温保存效果,能实现样本的常温保存和常温运输,保存液使用简便,保存粪便样本满足poct、ngs检测要求,整体制备方法整体简单节省了大量前处理成本。

上述实施例是对本发明的说明,不是对本发明的限定,任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。

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